| CAS |
850140-72-6 |
| Chinese Name |
阿法替尼 |
| English Name |
Afatinib |
| Synonyms |
BIBW 2992 |
| Molecular Formula |
C24H25ClFN5O3 |
| Molecular Weight |
485.94 |
| Solubility |
Soluble in DMSO |
| Purity |
≥98% |
| Appearance |
White to off-white Solid |
| Storage |
Powder:2-8℃，2 years;Insolvent(Mother Liquid):-20℃，6 months;-80℃，1 year |
| Delivery Time |
1-2 Days |
| MDL |
MFCD12407405 |
| SMILES |
O=C(NC1=C(C=C2C(C(NC3=CC(Cl)=C(C=C3)F)=NC=N2)=C1)O[C@H]4CCOC4)/C=C/CN(C)C.[(E)] |
| InChIKey |
ULXXDDBFHOBEHA-CWDCEQMOSA-N |
| InChI |
InChI=1S/C24H25ClFN5O3/c1-31(2)8-3-4-23(32)30-21-11-17-20(12-22(21)34-16-7-9-33-13-16)27-14-28-24(17)29-15-5-6-19(26)18(25)10-15/h3-6,10-12,14,16H,7-9,13H2,1-2H3,(H,30,32)(H,27,28,29)/b4-3+/t16-/m0/s1 |
| PubChem CID |
10184653 |
| Target Point |
EGFR |
| Passage |
Angiogenesis;Protein Tyrosine Kinase/RTK; JAK/STAT Signaling |
| Background |
Afatinib is an irreversible EGFR family inhibitor. |
| Biological Activity |
Afatinib (BIBW 2992) 是不可逆的 EGFR 家族抑制剂, 抑制EGFRwt, EGFRL858R, EGFRL858R/T790M 和 HER2的 IC50 分别为0.5 nM, 0.4 nM, 10 nM 和 14 nM[1-4]。 |
| IC50 |
EGFR:0.5nM (IC50) HER2:14nM (IC50) EGFRL858R:0.4nM (IC50) EGFRL858R/T790M:10nM (IC50) |
| In Vitro |
在无细胞体外激酶测定中，Afatinib(BIBW2992)dimaleate显示出对抗EGFR和HER2的野生型和突变形式的有效活性，类似于吉非替尼对L858R EGFR的效力，但对抗吉非替尼抗性的活性约高100倍。 L858R-T790M EGFR双突变体，IC50为10 nM。此外，BIBW2992与拉帕替尼和卡那替尼相比具有抗HER2的体外效力，IC50为14nM。该评估中最敏感的激酶是lyn，IC50为736 nM [1]。 Afatinib是这些ErbB家族受体的不可逆抑制剂。食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞系对Afatinib敏感，IC50浓度在较低的微摩尔范围内(孵育48小时：HKESC-1 = 78 nM，HKESC-2 = 115 nM，KYSE510 =3.182μM，SLMT-1 =4.625μM，EC-1 =1.489μM; 孵育72小时：HKESC-1 = 2 nM，HKESC-2 = 2 nM，KYSE510 =1.090μM，SLMT-1 =1.161μM，EC-1 = 109 nM)最大生长抑制超过95％。 Afatinib可以剂量和时间依赖的方式强烈诱导HKESC-2和EC-1中的G0 / G1细胞周期停滞[2]。 |
| In Vivo |
一旦治疗开始，阿法替尼(15mg / kg)强烈抑制HKESC-2肿瘤的生长。车辆的平均肿瘤大小和终点处理分别为348±24 mm3和108±36 mm3，两者之间存在显着差异。显然，在Afatinib给药结束后，肿瘤大小不会在短时间内反弹。在整个治疗过程中体重没有快速变化表明Afatinib的毒性很小，这种药物耐受性良好[2]。 |
| Cell Experiment |
将人ESCC细胞系EC-1，HKESC1和HKESC2，SLMT1和KYSE510在含有10％胎牛血清(FBS)的RPMI中培养。使用MTT通过比色测定评估细胞毒性。将肿瘤细胞在各孔培养基中的48孔板(每孔3000-8000个细胞)中培养。在细胞铺板后24小时加入完全培养基中的阿法替尼，并在37℃，5％CO 2下培养48和72小时。细胞生长抑制表示为用酶标仪在570nm处测量的对照培养物的吸光度百分比，并且通过GraphPad PRISM计算50％的最大生长抑制(IC 50)。在每个实验中，对于每种药物浓度(n = 3)进行一式三份孔，并且在三个独立实验中重复测定[2]。 |
| Animal Experiment |
小鼠[2]使用体重约16-20克的六周龄雌性无胸腺裸鼠(nu / nu)。通过将HKESC-2(重悬于50μLHBSS缓冲液中的6×104细胞)皮下接种到裸鼠的两侧，建立ESCC异种移植物。当肿瘤大小达到4-6mm直径时，它们在治疗(15mg / kg)或载体对照组中随机化。用于治疗的阿法替尼通过在给药前溶解在0.5％甲基纤维素中来制备。通过口服强饲法将药物或媒介物以5天的时间表给予小鼠，加上2天，连续两周。通过用卡尺监测肿瘤大小的变化来评估药物功效。用公式肿瘤体积=(宽度2×长度)/ 2计算肿瘤体积。 |
| Kinase Experiment |
感染后72小时，用HEPEX(20mM HEPES pH 7.4，100mM NaCl，10mMβ-甘油磷酸盐，10mM对硝基苯基磷酸盐，30mM NaF，从Sf9生物质中提取EGFR激酶结构域-GST融合蛋白，5 mM EDTA，5％甘油，1％Triton X-100，1 mM Na3VO4，0.1％SDS，0.5μg/ mL胃蛋白酶抑制剂A，抑肽酶20 KIU / mL，Leupeptin2μg/ mL，苯甲脒1 mM，2.5μg/ mL 3，4-二氯异香豆素，2.5μg/ mL反式环氧琥珀酰基-L-亮氨酰-L-酰氨基丁烷和0.002％PMSF)并用于测定IC 50值。每个100μL酶反应在50％Me2SO中含有10μLAfatinib(BIBW2992)，20μL底物溶液(200 mM HEPES pH 7.4，50 mM Mg-acetate，2.5 mg / mL poly(EY)，5μg/ mL bio -pEY)和20μL酶制剂。通过加入50μL在10mM MgCl 2中制备的100μMATP溶液开始酶促反应。测定在室温下进行30分钟，并通过加入50μL终止溶液(在20mM HEPES pH 7.4中的250mM EDTA)终止。将100μL转移至链霉抗生物素蛋白包被的微量滴定板，在室温下孵育60分钟后，用200μL洗涤溶液(50mM Tris，0.05％Tween20)洗涤板。向孔中加入100μL等份的HRPO标记的抗PY抗体(PY20H Anti-Ptyr：HRP)250ng / mL。孵育60分钟后，将板用200μL洗涤溶液洗涤三次。然后用100μLTMB过氧化物酶溶液(A：B = 1：1)显色样品。 10分钟后停止反应。将板转移至ELISA读数器并在OD 450nm下测量消光。所有数据点一式三份执行[1]。 |
| Data Literature Source |
[1]. Li D， et al. BIBW2992， an irreversible EGFR/HER2 inhibitor highly effective in preclinical lung cancer models. Oncogene. 2008 Aug 7; 27 (34) :4702-11.
[2]. Wong CH， et al. Preclinical evaluation of afatinib (BIBW2992) in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) . Am J Cancer Res. 2015 Nov 15; 5 (12) :3588-99.
[3]. Wang XK， et al. Afatinib circumvents multidrug resistance via dually inhibiting ATP binding cassette subfamily G member 2 in vitro and in vivo. Oncotarget. 2014 Dec 15; 5 (23) :11971-85.
[4]. Yoshioka T， et al. Antitumor activity of pan-HER inhibitors in HER2-positive gastric cancer. Cancer Sci. 2018 Apr; 109 (4) :1166-1176. |
| Unit |
Bottle |
| Specification |
10mg 10mM*1mL in DMSO 20mg 50mg |
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