| CAS |
244240-24-2 |
| English Name |
LFM-A13 |
| Synonyms |
;trans-4，5-didehydro-neral;2，4，6-Octatrienal，3，7-dimethyl;trans-dehydroneral;dehydrocitral; |
| Molecular Formula |
C11H8Br2N2O2 |
| Molecular Weight |
360 |
| Solubility |
Soluble in DMSO |
| Purity |
≥98% |
| Appearance |
Light yellow to yellow Solid |
| Storage |
Powder:-20℃，2 years;Insolvent(Mother Liquid):-20℃，6 months;-80℃，1 year |
| SMILES |
BrC1=C(NC(/C(C#N)=C(C)\O)=O)C=C(Br)C=C1 |
| Target Point |
Btk |
| Passage |
Protein Tyrosine Kinase/RTK;Angiogenesis |
| Background |
LFM-A13 is a potent BTK, JAK2, PLK inhibitor. |
| Biological Activity |
LFM-A13 是一种有效的 BTK，JAK2，PLK 抑制剂，可抑制 BTK，Plx1 和 PLK3 的活性，IC50 分别为 2.5 μM，10 μM 和 61 μM。[1-4] |
| In Vitro |
LFM-A13有效抑制Plx1，IC50为10μM;也抑制BRK，BMX，FYN，IC50分别为267，281，240和215μM[4]。LFM-A13显著抑制BTK活性，IC50为6.2±0.3μg/ mL(= 17.2±0.8μM)。计算的BTK，JAK1，JAK3，IRK，EGFR和HCK的LFM-A13的Kis为1.4，110，148，31.6，166和214μM。 LFM-A13(200μM)显著增加ALL-1细胞对神经酰胺诱导的细胞凋亡的化学敏感性[1]。 LFM-A13(100μM)抑制Epo诱导的R10细胞中EpoR，Jak2，Btk，Stat5和Erk1/2的磷酸化。 LFM-A13(100μM)抑制Jak2，Tec和Btk的自磷酸化，而不是COS细胞中的Lyn激酶自磷酸化[2]。 |
| In Vivo |
LFM-A13(50mg/kg，每周三次，ip)减弱小鼠中DMBA诱导的乳腺肿瘤发生。 LFM-A13单独或与紫杉醇组合显示出对BMBB/c小鼠中DMBA诱导的乳腺肿瘤发生率，平均肿瘤数量，平均肿瘤重量和大小的显著影响。 LFM-A13(50 mg/kg，每周三次，腹腔注射)显著降低PLK1，cyclin D1，CDK-4，P53和Bcl-2的表达，但增加小鼠p21，IκB，Bax和caspase 3的表达。 [3]。 LFM-A13(200 mg/kg)不会对大鼠造成血液学毒性。 LFM-A13(10或50mg/kg，ip)在乳腺癌的MMTV/Neu转基因小鼠模型中表现出剂量依赖性的抗肿瘤作用[4]。 |
| Animal Experiment |
将荷瘤小鼠随机分配给载体对照组或治疗组。肿瘤生长通过每周三天用三维卡尺测量肿瘤来确定，并表示为立方毫米(mm 3)的肿瘤体积。使用长椭球体的体积公式计算肿瘤体积，V = 4/3×3.14×长度/ 2×宽度/ 2×深度/ 2。由于第0天转基因肿瘤体积的大的异质性，将每只小鼠的肿瘤生长标准化为该特定肿瘤的起始体积。因此，每只小鼠也作为其自身对照，并且产生肿瘤生长曲线以显示肿瘤体积的变化率。每周两次腹膜内注射LFM-A13(10或50mg/kg)，每周连续5天。在第1，3，5，8，10和12天以6.7mg/kg的剂量水平腹膜内施用紫杉醇。吉西他滨在第1，8和15天以33.7mg/kg的剂量水平施用。将大鼠[4] Lewis大鼠保持在含有高压灭菌食物，水和寝具的微量过滤笼中。以多剂量水平静脉内注射LFM-A13治疗Lewis大鼠。 LFM-A13以含有10％DMSO作为载体的0.5mL推注给药。在第7天选择性地处死动物以通过评估多个器官中毒性病变的存在来确定LFM-A13的毒性。在用氯胺酮：甲苯噻嗪麻醉后通过心内穿刺收集血液并立即肝素化。使用HESKA Vet ABC-Diff血液学分析仪测定血细胞计数(红细胞[RBC]，白细胞[WBC]和血小板[Plt])。在通过手动差异计数确定嗜中性粒细胞和淋巴细胞的百分比后，从WBC值计算绝对中性粒细胞计数(ANC)和绝对淋巴细胞计数(ALC)。对于载体对照和LFM-A13处理合并实验室参数的值，并且对于每个参数，使用学生t检验(载体与LFM-A13处理，不等方差，双尾)评估平均值之间的差异的统计学显著性。计算在Excel电子表格中执行。为了确定显著效果，使用Bonferroni方法调整p值以控制随机变化。对于组织病理学研究，将福尔马林固定组织脱水并通过常规方法包埋在石蜡中。制备具有固定的4-5微米组织切片的载玻片，并用苏木精和曙红染色。 |
| Kinase Experiment |
将纯化的His6-Plx1(250ng)加入到含有1x激酶缓冲液(10mM Tris-HCl，pH7.5，10mM MgCl2和1mM TT)，25μM冷ATP和1μCi的20μL反应混合物中[ γ-32P] ATP在不同浓度的LFM-A13存在下，范围为5μg/ mL(13.9μM)至100μg/ mL(278μM)。将反应混合物在室温下温育15-30分钟，并通过加入2×SDS-PAGE还原样品缓冲液终止自磷酸化。在冷ATP存在下进行平行实验。然后使用市售的抗Plk抗体对激酶反应进行免疫印迹。免疫印迹证实每个反应中存在相同量的Plx1蛋白。此外，我们还检测了LFM-A13对Plx1对底物磷酸化的影响。简而言之，首先将250ng纯化的Plx1与不同浓度的LFM-A13在室温下孵育1小时。孵育1小时后，将含有反应混合物的试管置于冰上，加入底物，GST-Cdc25肽(254-316)(200ng)，激酶缓冲液和[γ-32P] ATP并激活反应允许在室温下进行15分钟。用抗Cdc25抗体的免疫印迹用于证实在每种反应混合物中存在等量的底物肽。在测定中使用抗Plk抗体，谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和ECL试剂盒的多克隆抗体。 LFM-A13的人PLK3抑制模式在滴定实验中使用增加浓度的[γ-32P] ATP和纯化的N-末端His6-标记的重组人PLK3，残基19-301，在Sf21昆虫细胞中由杆状病毒表达来检测。简言之，在25μL的最终反应体积中，将PLK3(h)(5-10mU)与8mM MOPS，pH 7.0，0.2mM EDTA，2mg/mL酪蛋白，10mM乙酸镁和[γ]一起温育。 -32P-ATP](比活度约为500cpm/pmol，根据需要浓缩)。通过添加MgATP混合物引发反应。在室温下孵育40分钟后，通过加入5μL的3％磷酸溶液终止反应。然后将10微升反应物点在P30滤垫上，在75mM磷酸中洗涤3次，每次5分钟，在甲醇中洗涤一次，然后干燥并闪烁计数。 LFM-A13的PLK3的Ki由底物的磷酸化强度(1/v)与抑制剂(i)的浓度(即LFM-A13)的倒数图计算[4]。 |
| Data Literature Source |
[1]. Mahajan S，et al. Rational design and synthesis of a novel anti-leukemic agent targeting Bruton's tyrosine kinase (BTK)，LFM-A13 [alpha-cyano-beta-hydroxy-beta-methyl-N-(2，5-dibromophenyl)propenamide]. J Biol Chem. 1999 Apr 2;274(14):9587-99.
[2]. van den Akker E，et al. The Btk inhibitor LFM-A13 is a potent inhibitor of Jak2 kinase activity. Biol Chem. 2004 May;385(5):409-13.
[3]. 'Sahin K，et al. LFM-A13，a potent inhibitor of polo-like kinase，inhibits breast carcinogenesis by suppressing proliferation activity and inducing apoptosis in breast tumors of mice. Invest New Drugs. 2017 Nov 15.'
[4]. Uckun FM，et al. Anti-breast cancer activity of LFM-A13，a potent inhibitor of Polo-like kinase (PLK). Bioorg Med Chem. 2007 Jan 15;15(2):800-14. Epub 2006 Oct 26. |
| Unit |
Bottle |
| Specification |
5mg 10mM*1mL in DMSO 10mg 50mg |
English
中文
Manual Download
