| CAS |
88321-09-9 |
| Chinese Name |
阿洛司他丁 |
| English Name |
Aloxistatin |
| Synonyms |
E64c ethyl ester;E64d;Loxistatin |
| Molecular Formula |
C17H30N2O5 |
| Molecular Weight |
342.43 |
| Solubility |
Soluble in DMSO ≥5mg/mL(Need ultrasonic) |
| Purity |
≥98% |
| Appearance |
White to off-white Solid |
| Storage |
Powder:2-8℃，2 years;Insolvent(Mother Liquid):-20℃，6 months;-80℃，1 year |
| MDL |
MFCD00132883 |
| SMILES |
O=C([C@H]1O[C@@H]1C(N[C@H](C(NCCC(C)C)=O)CC(C)C)=O)OCC |
| Target Point |
Cysteine protease |
| Passage |
Metabolic Enzyme&Protease |
| Background |
It is an irreversible membrane permeable cysteine protease inhibitor with the activity of inhibiting platelet aggregation. |
| Biological Activity |
Aloxistatin (E64d) 是可渗透细胞,不可逆的广谱半胱氨酸蛋白酶 (cysteine protease) 抑制剂。[1-5] |
| In Vitro |
半胱氨酸蛋白酶抑制剂Aloxistatin(E64d)抑制蛋白酶抗性朊蛋白(PrP-res)在ScNB细胞中的积累，IC50为0.5±0.11μM。对于细胞表面PrP-sen检测，PrP-sen从用磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PIPLC)处理的培养基中免疫沉淀，以从细胞表面释放脉冲-35S标记的PrP-sen。在所有对照细胞的标记培养基中，氧化抑制素分别维持在15μM[1]。当与NK-92或YT 5细胞预孵育时，Aloxistatin(E64d)(特异性阻断半胱氨酸蛋白酶，但不阻断丝氨酸蛋白酶，如颗粒酶)能够完全阻断CatL底物Z-Phe-Arg-氨基甲基香豆素的更新[ 2]。 Aloxistatin(E64d)是一种广谱细胞渗透性半胱氨酸蛋白酶抑制剂[3]。 |
| In Vivo |
向豚鼠口服施用氧氟沙星(E64d)可导致脑，脑脊液和血浆Aβ(40)和Aβ(42)的剂量依赖性减少。 Aloxistatin还可引起脑CTFβ的双相剂量依赖性降低。 Aloxistatin引起脑sAβPPα的剂量依赖性增加。对于Aloxistatin剂量为5mg / kg /天或更高剂量，平均sAβPPα水平显著高于无剂量组，其中最高的Aloxistatin剂量导致sAβPPα的最大增加比对照组高约54％。与Aβ效应类似，口服Aloxistatin给药可产生脑组织蛋白酶B活性的双相剂量依赖性降低。最小有效剂量为约1mg / kg /天，最高的Aloxistatin剂量导致脑组织蛋白酶B活性的最大降低比对照组低约91％。因此，Aloxistatin以与抑制组织蛋白酶Bβ-分泌酶活性的化合物一致的方式降低豚鼠脑组织蛋白酶B的活性[4]。 Aloxistatin(E64d)抑制大鼠AT1AR和ACE基因表达的增加。奥美沙坦或Aloxistatin的施用减少了HF大鼠心肌内冠状动脉的超氧化物产生的增加[5]。 |
| Cell Experiment |
按照上述极性标记物的方案，通过染色增殖标记物Ki67或凋亡标记物切割的半胱天冬酶3来评估细胞增殖和凋亡。将MCF10变体在3D rBM覆盖培养物中生长4天，并用0.1％DMSO，5μMCO74MeMe或5μM盐酸曲霉毒素处理。通过用Zeiss Axiophot落射荧光显微镜在两个单独的盖玻片上计数总共100个结构来确定Ki67或切割的半胱天冬酶3阳性结构的百分比。如果结构含有至少一个Ki67细胞染色，则认为结构为Ki67阳性。如果结构含有至少一个对切割的半胱天冬酶3呈阳性的细胞并且阳性细胞不定位于发育中腔的中心，则认为结构为半胱天冬酶3阳性[3]。 |
| Animal Experiment |
小鼠和猪[4]使用豚鼠(雄性，Hartley品系，平均体重400g，对应于约6周龄的动物)。使用表达含有wtβ-分泌酶位点和伦敦突变β-分泌酶位点序列的人AβPP的雄性转基因小鼠。通过强饲法递送药物提供了精确给药的优点但是具有创伤性，因此仅适合于相对短的给药期(长达约一周)。通过管饲递送用于豚鼠研究。将氧化苦参素以指定浓度(0.1，1.0，5和10mg / kg)悬浮于Me 2 SO中，并使用饲管每日通过管饲法施用。通过管饲单独的Me 2 SO处理载体对照动物。大鼠[5]使用雄性近交DS大鼠。断奶的大鼠喂食含有0.3％NaCl的实验室饲料直至7周龄。 7周后喂食8％NaCl饮食的DS大鼠在第12周表现为继发于高血压的补偿性同心左心室(LV)肥大，并且在19周时出现肺部充血的致命性LV失败的明显阶段。因此，DS大鼠从7周龄开始喂食8％NaCl饮食，随机分为HF组，Aloxistatin组(每天每公斤体重10 mg，每隔一天腹腔注射)或奥美沙坦组(3)在12至19周龄期间每天的mg / kg(每组n = 10)。奥美沙坦(一种ARB)和Aloxistatin的剂量在初步实验和之前的研究中确定。保持在0.3％NaCl饮食上的DS大鼠用作年龄匹配的对照(对照组，n = 10)。在19周龄时，通过腹膜内过量戊巴比妥钠(50mg / kg)使所有大鼠安乐死，取出心脏用于生物学和组织学分析。从腹主动脉收集动脉血以测量肾素活性。使用非侵入性尾套法在7周龄，每周的清醒大鼠中测量收缩压和心率。在单独的实验中，以与上述实验相同的方式给予来自7周龄的低盐饮食的12周龄DS大鼠，载体，奥美沙坦或盐酸曲霉素(每组n = 5)，用于测量靶向mRNA和蛋白质水平的LV组织立即置于液氮中并储存在-80℃。 |
| Kinase Experiment |
将CTL和NK细胞(0.8×106 / mL)用抑制剂L1(10-20μM)或Aloxistatin(20-30μM)在37℃下在24孔板中处理24小时。然后将细胞用于51Cr释放测定中或裂解以在蛋白质印迹中检查穿孔素。如所示，在一些51Cr-释放测定中，在4小时反应期间还以相同浓度添加抑制剂。使用NP-40裂解缓冲液(25mM HEPES，250mM NaCl，2.5mM乙二胺四乙酸，0.1％体积/体积Nonidet P-40)制备细胞裂解物，并使用Bradford测定法测定总蛋白质浓度。加载等量的蛋白质并在8％SDS-PAGE凝胶上分离。使用所示的适当抗体检测人或小鼠穿孔素。抗肌动蛋白抗体用作上样对照[2]。 |
| Data Literature Source |
[1]. Doh-Ura K，et al. Lysosomotropic agents and cysteine protease inhibitors inhibit scrapie-associated prion protein accumulation. J Virol. 2000 May;74(10):4894-7.
[2]. Konjar S，et al. Human and mouse perforin are processed in part through cleavage by the lysosomal cysteine proteinase cathepsin L. Immunology. 2010 Oct;131(2):257-67.
[3]. Mullins SR，et al. Three-dimensional cultures modeling premalignant progression of human breast epithelial cells: role of cysteine cathepsins. Biol Chem. 2012 Dec;393(12):1405-16.
[4]. Hook G，et al. The cysteine protease inhibitor，E64d，reduces brain amyloid-β and improves memory deficits in Alzheimer's disease animal models by inhibiting cathepsin B，but not BACE1，β-secretase activity. J Alzheimers Dis. 2011;26(2):387-408.
[5]. Cheng XW，et al. Superoxide-dependent cathepsin activation is associated with hypertensive myocardial remodeling and represents a target for angiotensin II type 1 receptor blocker treatment. Am J Pathol. 2008 Aug;173(2):358-69. |
| Unit |
Bottle |
| Specification |
1mg 2mg |
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