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革兰氏染色液试剂盒

实验简介:
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌细胞壁较厚,肽聚糖网层次较多且交联致密,脱色液脱色时,肽聚糖脱水使孔径缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上,呈紫色。革兰氏阴性菌细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,脱色后类脂外膜迅速溶解,缝隙加大,结晶紫与碘复合物溶出,因此脱色后再经番红复染,呈红色。
实验步骤:
1.涂片固定:
菌液涂片,干燥、固定。固定时通过火焰1-2次即可,不可过热,以载玻片不烫手为宜。
2.染色:
一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是:
① 滴加结晶紫染色液后,染色1分钟,水洗。
② 滴加碘液后染色1分钟,水洗。
③ 滴加脱色液,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约20-60秒,水洗,吸去水分。
④ 滴加番红染色液后,染色1分钟,水洗。
⑤ 滤纸吸干多余水分或在空气中晾干后,100倍油镜镜检。
革兰氏染色的关键在于严格掌握脱色程度,如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌。此外,菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌体自行溶解,都常呈阴性反应。
注意事项:
1.标本涂片不宜太厚,建议按操作要求进行。若涂片较厚,应延长脱色时间,至不再出现紫色为止。
2.玻片通过火焰温度不能太高。碘液变透明,则不能使用。
3.如无油镜观测条件或切片须长期保存,可于晾干后滴加中性树脂封片,40倍镜观察。
4.水洗时动作要轻柔,沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗,以免把菌体冲掉。
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