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Masson三色染色试剂盒
实验简介:
结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维是分布最广、含量最多的一种纤维。Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
Masson试剂盒的特点：◆染色稳定；◆分化时间短，1-2秒；◆色彩清楚鲜艳；◆使用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；◆所染切片保存时间长且不易褪色。
实验步骤:
一、石蜡切片：
1.切片常规脱蜡至水。
2.用配制好的Weigert铁苏木素染色液染色5min-10min。
3.酸性乙醇分化液分化5-15s，水洗。
4.Masson蓝化液返蓝3-5min，水洗。蒸馏水洗1min。
5.丽春红品红染色液染色5-10min。
6.在上述操作过程中按蒸馏水：弱酸溶液=2:1比例配置弱酸工作液，用弱酸工作液洗1min。
7.磷钼酸溶液洗1-2min。用配置好的弱酸工作液洗1min。
8.直接放入苯胺蓝染色液中染色1-2min。用配置好的弱酸工作液洗1min。
9.95%乙醇快速脱水2-3s，无水乙醇脱水3次，每次5-10s。
10.二甲苯透明3次，每次1-2min，中性树胶封固。
二、冰冻切片
1.切片在10%的福尔马林溶液中固定1小时。
2.用Bouins固定液室温过夜处理。
3.后续操作同石蜡切片第2-15步。
1.切片常规脱蜡至水。
2.用配制好的Weigert铁苏木素染色液染色5min-10min。
3.酸性乙醇分化液分化5-15s，水洗。
4.Masson蓝化液返蓝3-5min，水洗。蒸馏水洗1min。
5.丽春红品红染色液染色5-10min。
6.在上述操作过程中按蒸馏水：弱酸溶液=2:1比例配置弱酸工作液，用弱酸工作液洗1min。
7.磷钼酸溶液洗1-2min。用配置好的弱酸工作液洗1min。
8.直接放入苯胺蓝染色液中染色1-2min。用配置好的弱酸工作液洗1min。
9.95%乙醇快速脱水2-3s，无水乙醇脱水3次，每次5-10s。
10.二甲苯透明3次，每次1-2min，中性树胶封固。
二、冰冻切片
1.切片在10%的福尔马林溶液中固定1小时。
2.用Bouins固定液室温过夜处理。
3.后续操作同石蜡切片第2-15步。
注意事项:
1.切片脱蜡应尽量干净。
2.取A1、A2等量混合，成为Weigert铁苏木素染色液，一般24h失去染色能力。
3.组织固定起着非常重要的作用，使用不同的固定液可延长或缩短染色时间。
4.经典Masson三色染色中，用Harris 苏木精染核，但Harris 苏木精染核后切片颜色不够鲜艳，本染液采用Weigert苏木素染细胞核，因为染色的目的主要在于区分胶原纤维和肌纤维，一般也可以省略该染色步骤。
5.酸性乙醇分化时间应该依据切片薄厚，组织的类别和新旧而定。
6.弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳，如使用量大可自行配置0.1-0.3%乙酸溶液予以替代。若苯胺蓝过染，可省略第9步，磷钼酸清洗后直接进行苯胺蓝染色。
7.磷钼酸分化时要在镜下控制，分化到胶原纤维呈淡红色、纤维呈红色即可。分化时间根据染色深浅而定，一般1-2min。 Masson蓝化液亦可自行配制Scott促蓝液或0.1-1%碳酸锂水溶液予以替代。
2.取A1、A2等量混合，成为Weigert铁苏木素染色液，一般24h失去染色能力。
3.组织固定起着非常重要的作用，使用不同的固定液可延长或缩短染色时间。
4.经典Masson三色染色中，用Harris 苏木精染核，但Harris 苏木精染核后切片颜色不够鲜艳，本染液采用Weigert苏木素染细胞核，因为染色的目的主要在于区分胶原纤维和肌纤维，一般也可以省略该染色步骤。
5.酸性乙醇分化时间应该依据切片薄厚，组织的类别和新旧而定。
6.弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳，如使用量大可自行配置0.1-0.3%乙酸溶液予以替代。若苯胺蓝过染，可省略第9步，磷钼酸清洗后直接进行苯胺蓝染色。
7.磷钼酸分化时要在镜下控制，分化到胶原纤维呈淡红色、纤维呈红色即可。分化时间根据染色深浅而定，一般1-2min。 Masson蓝化液亦可自行配制Scott促蓝液或0.1-1%碳酸锂水溶液予以替代。
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